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無(wú)血清的培養(yǎng)基的制備
現(xiàn)在應(yīng)用的無(wú)血清培養(yǎng)基種類(lèi)很多,一些廠家可提供針對(duì)特殊類(lèi)型細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基.制備無(wú)血清培養(yǎng)基的操作方法與制備常規(guī)培養(yǎng)基的程序大致相同.配制時(shí)要用超純的試劑和水,小心配制Ca2+,Fe2+或Fe3+的溶液,防止產(chǎn)生沉淀.在堿性pH的條件和有磷酸鹽存在的條件下金屬鹽溶液會(huì)產(chǎn)生沉淀,在培養(yǎng)基或鹽溶液經(jīng)過(guò)高壓滅菌后尤為如此,所以?xún)?chǔ)存液中的陽(yáng)離子必須保存在低pH條件下,并且要保證無(wú)磷酸鹽的存在.溶液要經(jīng)過(guò)高壓滅菌或過(guò)濾消毒.通常推薦的方法是臨用培養(yǎng)基之前再加陽(yáng)離子.或者將各種組分通常要配制成一系列的儲(chǔ)存液:1000×的礦物質(zhì)和維生素,50×的酪氨酸,色氨酸,苯丙氨酸溶解于0.1mol/L HC1中,100×的必需氨基酸溶解于水中,10×的鹽溶解于水中,還有其他的特殊輔助因子,脂類(lèi)等配制成1000×溶液.這些成分要按照正確的比例配制并稀釋到終的濃度,然后檢測(cè)pH和滲透壓.
建議在使用培養(yǎng)基之前再分別加生長(zhǎng)因子,激素,和細(xì)胞黏附因子,并且要調(diào)整到適合于特定的實(shí)驗(yàn)條件.
