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Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書
點擊次數(shù):1308 更新時間:2020-09-01

  

 

 

     Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書

 

Super-BradfordProteinAssayKit                                                       

Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書

 



Cat.No. K0013                         

 

保存:2-8℃

 

組分說明



 

Catalogno.                                 K0013

KitSize                                800 次/微孔,100 次/試管

BradfordProteinAssayReagent               200ml

BSA 標準液(2mg/ml)                          2ml

 



 

產(chǎn)品簡介

 

    Bradford 法是簡單和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后,產(chǎn)生藍色化合物,反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系,因此可通過檢測 595nm 的光吸收值的大小來計算蛋白的含量。本產(chǎn)品將傳統(tǒng)的 Bradford 方法進行了改良,大限度的加大蛋白定量的線性范圍,變異性小于普通考馬斯亮藍染色法,靈敏度范圍為 100-1,500 μg/ml。使用本產(chǎn)品反應(yīng)迅速,顏色產(chǎn)物 1 小時內(nèi)保持穩(wěn)定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統(tǒng),不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。

 

注意事項 

 

 1.  如待測樣品中含較多的干擾物質(zhì)(具體見附表 1),可采用 BCA 蛋白定量試劑盒(K0014)或其他蛋白定量產(chǎn)品。

 

 2.  BSA 標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋)。

 

 3.  本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量,所測蛋白分子量必須大于 3kD。

 

 4.  操作中請佩戴手套。

 

 5.  本產(chǎn)品僅限科研使用。

 



操作步驟(以大腸桿菌表達系統(tǒng)為例)

 

 1.  稀釋 BSA 標準品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。

 

 

                                                

管號    稀釋液用量(μl)   BSA標準品用量(μl)    BSA標準品終濃度(μg/ml)

                                                 

 

A         0       100                 2,000

B         50        150                1,500

 

C        200        200                 1,000

 

D       200       200(從C管中?。?nbsp;           500

E      200        200(從D管中取)          250

 

F    200         200(從E管中?。?nbsp;           125

G     200         0                 0(空白)

 

 

 2.  試管檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)

 

    1)按上表稀釋標準品,將 30 μl 稀釋好的 BSA 標準品分別加到作好標記的試管中。 

    2)取干凈的試管,分別加入 30 μl 待測蛋白樣品(原液或稀釋液),并作好標記,推薦每個測定做 2-3 個平行反應(yīng)。

 

    3)向步驟 1)和步驟 2)的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,室溫放置 10 分鐘。

 

    4)用分光光度計測定 595nm 處的吸光值。

 

    5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

 

        注意:數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計算機繪制得曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

 

    6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi),請重新稀釋樣品后再次測定。

 

 3.  微孔檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)

 

    1)將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5 μl 分別加到作好標記的 96 孔板微孔中。 

 

    2)每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,蓋上 96 孔板蓋,室溫放置 10 分鐘。

 

    4)用酶標儀測定 595nm 處的吸光值。

 

    5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

 

        注意:數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計算機繪制得曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

 

    6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi),請重新稀釋樣品后再次測定。

 

  

 

實驗代做服務(wù):

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費代檢測

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細胞檢測

激光共聚焦

透射電鏡服務(wù)

DNA甲基化實驗

免疫共沉淀(Co-IP)

DNA甲基化

掃描電鏡實驗

microRNA 測序

半定量RT-PCR

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

原位雜交(FIsh)

石蠟/冰凍切片

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測

Taqman探針

細胞劃痕

基因組DNA提取

 

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