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EA05C\00 2018-01版
豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷法ELISA檢測試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷法ELISA檢測試劑盒
英文名稱：Blocking ELISA Kit For Pseudorabies Virus gB Antibody Test Kit
【規(guī)格】
96T×2/盒
【用途】
檢測血清、血漿中豬偽狂犬病毒gB抗體，適用于對豬場疫苗免疫狀況的評價以及感染豬的血清學(xué)診斷。
【檢驗原理】
本試劑盒是用來檢測豬血清中豬偽狂犬病毒gB抗體的試劑盒。該試劑盒是用豬偽狂犬病毒抗原包被的微量反應(yīng)板，利用阻斷ELISA原理來檢測豬血清中豬偽狂犬病毒抗體。用酶標(biāo)儀在雙波長(450nm，630nm)測定該反應(yīng)體系的吸光度。當(dāng)被測樣品中含有豬偽狂犬病毒抗體(陽性結(jié)果)時，顯色就會變淺，當(dāng)被測樣品中不含有抗豬偽狂犬病毒抗體(陰性結(jié)果)時，顏色就會變深。樣本的阻斷率可以通過與陰性對照吸光度的比值來確定。
【主要組成成份】
1 | 抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標(biāo)記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | 陰性對照血清 | 1ml | 綠色帽 |
5 | 陽性對照血清 | 1ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12 ml *2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍(lán)色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 | |
10 | 說明書 | 1份 | |
【自備器材】
1．酶標(biāo)儀：雙波長450/630nm濾光片
2．精確的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）
3．水浴箱或恒溫箱
4．微量振蕩器
5．洗液吸移裝置
6．一次性槍頭（10ul，200ul）
7．去離子水
【樣本要求】
本試劑檢測的樣本為豬血清或血漿，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過一周，長期應(yīng)在－20℃以下保存。
【實驗準(zhǔn)備】
1．試劑盒組分回溫平衡：試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min，可以獲得最佳結(jié)果。
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本和陰性、陽性對照血清作2倍稀釋（即：60μl血清加60μl樣本稀釋液），混合均勻。
3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（即1ml濃縮洗滌液加19ml水），即可使用。注意：使用前要使結(jié)晶*溶解。
【檢驗方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測時，設(shè)陰、陽性對照各2孔，分別加入稀釋好的陰性、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。
2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，靜置10秒，直接甩出，洗滌3次，最后一次洗滌后在吸水紙上拍干板內(nèi)液體。
4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl。
5. 溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
6．洗板：同步驟3。
7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，室溫37℃避光反應(yīng)10分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數(shù)。
9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
在酶標(biāo)儀上測各孔OD值，試驗成立的條件是陰性對照OD值大于1.0，陽性對照的阻斷率均大于60％，若試驗不成立，有可能是操作失誤造成，應(yīng)重讀說明書，再操作一次。
S=樣品孔OD值，N=陰性對照孔平均OD值
阻斷率=(1–S/N)×100%
若被檢樣品的阻斷率小于或等于50%，該樣品判為PRV抗體陰性。
若被檢樣品的阻斷率大于或等于60%，該樣品判為PRV抗體陽性。
若被檢樣品的阻斷率在50%~60%之間，該樣品判為可疑。
【注意事項】
1．本試劑盒僅供研究使用。
2．不要使用過期的試劑盒組份，不要把不同批次的組份混合使用。
3．使用試劑盒之前，一定要仔細(xì)閱讀說明書。
4 使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（20～25℃），并搖動使沉淀溶解（最好在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘），然后用去離子水作20倍稀釋（例如：50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水），混勻，稀釋好的洗滌液在2～8℃可以存放7-10日。
5．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
6．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃－8℃避光保存。
7．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。
8．加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個月。
【生產(chǎn)日期及批號】
詳見包裝袋和外包裝盒。
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