細(xì)胞分離液屬于生化試劑,利用細(xì)胞分離液對(duì)機(jī)體細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行前處理,以獲取所需要的細(xì)胞標(biāo)本。
細(xì)胞分離液是一種經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆粒,經(jīng)過高速離心后可形成連續(xù)密度梯度,由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。
細(xì)胞分離液的配置與使用:
1、不同濃度(密度)分離液的制備: 先用9份分離液與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
2、不連續(xù)密度梯度層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤(rùn),除去多余血清,這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下,使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長(zhǎng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時(shí)相鄰兩層比重相差不大時(shí),可將液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
3、裝樣:樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異,一般加樣體積不宜過大,細(xì)胞濃度也不可過高,否則會(huì)影響細(xì)胞的分離和回收。
4、離心:一般采用離心力為400g,時(shí)間20~25min。由于多層之間密度差別不大,因此離心機(jī)加速、降速時(shí)要慢,要平穩(wěn)。
5、取樣:當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時(shí),可逐層去除液后收集界面部位的細(xì)胞;有時(shí)大部分細(xì)胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測(cè)用。