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雞外周血白細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):3237 更新時(shí)間:2016-07-28

 

 

 

雞外周血白細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)

 

(細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué))

 

【產(chǎn)品規(guī)格】

 

200ml/Kit

 

貨號(hào):WBC1090C

 

【產(chǎn)品組成】

 

為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:

 

 

 

 

名稱

產(chǎn)品編號(hào)

 

規(guī)格

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

A

雞外周血白細(xì)胞分離液

 

 

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

B

樣本稀釋液(贈(zèng)品)

2010C1119

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

C

清洗液(贈(zèng)品)

 

 

2010X1118

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

D

紅細(xì)胞裂解液(贈(zèng)品)

NH4CL2009

 

100ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

E

說(shuō)明書(shū)

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

 

 

 

 

 

 

 

A 適用儀器

 

 

 

 

 

 

 

 

zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

 

 

 

 

 

B 耗材

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

產(chǎn)品名稱

 

產(chǎn)品貨號(hào)

 

產(chǎn)地

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 離心管散裝

 

339650

 

美國(guó) NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 離心管架裝

 

339651

 

美國(guó) NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 離心管散裝

 

339652

 

美國(guó) NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 離心管架裝

 

339653

 

美國(guó) NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

無(wú)菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【檢驗(yàn)方法】

 

 

 

 

 

 

 

 

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

 

首先取抗凝血,根據(jù)樣本量大小,分以下兩種情況:

 

情況 A:血液樣本量小于 5ml 時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:

 

  • 取一支 15ml 離心管,先加入 5ml 分離液

 

  • 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min(注:如改

 

 

 

變血液樣本及分離液用量,需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間,具體離心條件需客戶自行摸

 

索,以達(dá)到zui理想分離效果。)

 

  • 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層(一層或兩層),加入 10 ml 清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。250g,離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次,即得所需白細(xì)胞。

 

  • 如有紅細(xì)胞殘留請(qǐng)使用紅細(xì)胞裂解液(產(chǎn)品編號(hào):NH4CL2009)裂解紅細(xì)胞,具體操

 

作方法詳見(jiàn)紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明。

 

情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:

 

  • 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,先加入與樣本等量的分離液。

 

  • 將血液樣本小心加于分離液之液面上,450-650g(zui大離心力可至 1000g),離心20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到zui理想分離效果。加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二)。

 

  • 剩余步驟同情況 A”中步驟 3 與步驟 4。

 

【注意事項(xiàng)】

 

  • 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得zui理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

 

  • 本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。

 

  • 分離液用量大于稀釋后血液樣本時(shí),分離效果更佳。

 

  • 當(dāng)血液樣本粘度過(guò)高需稀釋時(shí),*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號(hào):2010C11191:1 稀釋混勻備用。注:不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞?huì)降低細(xì)胞得率及活性。如血液樣本經(jīng)過(guò)稀釋則分離過(guò)程中需適當(dāng)降低離心力和離心時(shí)間。

 

  • 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低,請(qǐng)技術(shù)以尋求幫助。

 

【儲(chǔ)存條件及有效期】

 

18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟

 

封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

 

 

 

 

【參考值(參考范圍)】

 

本實(shí)驗(yàn)白細(xì)胞提取率及純度大于 80%。

 

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

 

 

紅細(xì)胞

 

白細(xì)胞

 

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

4.0-10.0×109

 

含量(個(gè)/L

4.0-5.5×1012

中性粒細(xì)胞

淋巴細(xì)胞

單核細(xì)胞

1.0-3.0×1011

 

 

50%-70%

20%-40%

3%-8%

 

 

 

 

 

 

 

 

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

 

  • 所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

  • 所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

  • 所獲得白細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

 

D.PCR 技術(shù)

 

注:上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸本公司搜索細(xì)胞分離、

 

純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè),并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用。

 

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

 

1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:

 

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

 

 

 

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短

適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

 

 

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

 

 

 

 

離心后白環(huán)層彌散

細(xì)胞密度過(guò)大

調(diào)整細(xì)胞密度

 

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)

細(xì)胞密度過(guò)小

 

 

 

 

 

  • 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

 

  • 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

 

注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到zui理想分離效果,

離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號(hào)

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