葡聚糖凝膠(G-15)吸水率是1.5mL/g干膠,葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹;G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同;葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
葡聚糖凝膠(G-15)操作步驟:
1、毫升蒸餾水,攪拌均勻,在室溫溶脹6小時(shí),或沸水浴溶脹2小時(shí),一般采用后一種方法;再用傾瀉法除去凝膠上層水及細(xì)小顆粒,用蒸餾水反復(fù)洗滌幾次,再以緩沖溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗滌2—3次,使pH和離子強(qiáng)度達(dá)到平衡,zui后抽去溶液及凝膠顆粒內(nèi)部氣泡,凝膠可保存在緩沖液內(nèi)。
2.裝柱:將層析柱洗凈,垂直固定在鐵支架上,選擇有薄膜端作為層析柱下口,將下口凝膠表面平齊時(shí),關(guān)閉下端出口。
3、用少量洗脫液清洗層析柱加樣區(qū),共洗滌三次,每次清洗液應(yīng)*進(jìn)入凝膠柱內(nèi)后,再進(jìn)行下一次洗滌;zui后在凝膠表面上加入洗脫液,保持高度為3—4cm。
4、洗脫與收集:連接好凝膠柱層析系統(tǒng),調(diào)節(jié)洗脫液流速為每分鐘1毫升,進(jìn)行洗脫;仔細(xì)觀察樣品在層析柱內(nèi)的分離現(xiàn)象,收集洗脫液,每收集3毫升即換一支收集管(試管預(yù)先編號(hào)),收集約20管左右,樣品即可*被洗脫下來(lái);將各收集管中的洗脫液分別用721型分光光度計(jì)在波長(zhǎng)540nm處測(cè)定其光密度。
5、凝膠回收處理方法:將樣品*洗脫下來(lái)后,繼續(xù)用三倍柱床體積的洗脫液沖洗凝膠后,將柱下口放在小燒杯中,慢慢打開,再將上口慢慢松開,使凝膠全部回收至小燒杯中,備用。