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細胞生長曲線的測定實驗目的：

掌握繪制細胞生長曲線的原理和方法。

細胞生長曲線的測定背景與原理：

生長曲線是測定細胞生長數(shù)的常用方法，也是判定細胞活力的重要指標，是培養(yǎng)細胞生物學特性的基本參數(shù)之一。--般細胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮后貼壁，隨后渡過長短不同的潛伏期，即進入快速生長的指數(shù)生長期。在細胞達到飽和密度后，停止生長，進入平臺期，然后退化衰亡。為了準確描述整個過程中細胞數(shù)目的動態(tài)變化，需連續(xù)對細胞進行計數(shù)。通常計數(shù)6天。為精確起見，一般每次實驗設3個平行重復。

[材料、試劑與儀器]

1、實驗材料:

Hela細胞系。

2、實驗試劑:

DMEM培養(yǎng)基(青霉素，鏈霉素，10%血清) ，0.25%胰蛋白酶溶液， 臺酚藍染液。

3、實驗儀器:

超凈工作臺，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，微量移液器，血細胞計數(shù)板，培養(yǎng)瓶，離心管,移液管，廢液缸，蓋玻片, 24孔板。

[方法與步驟]

1、取生長良好的細胞，用培養(yǎng)基制成細胞懸液后計數(shù)。根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果按5x104/mL作傳代培養(yǎng)接種于24孔板中，共接種21孔細胞。1 m/孔。余下三孔可設傳代培養(yǎng)的對照。

2、24h后每天記錄細胞數(shù)目，每次取3孔細胞，分別進行計數(shù)。計算平均值。連續(xù)計數(shù)7d。細胞用胰酶消化后加入一定量的培養(yǎng)基,混勻制成細胞懸液。取少量懸液與臺酚藍1:1混臺。取一干凈的血細胞計數(shù)板,蓋上蓋片，從蓋片兩邊滴入細胞懸液使之充滿計數(shù)板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡，也不能太多，否則會使蓋片浮起而使細胞計數(shù)不準。

3、低倍鏡下觀察，活細胞不著色，臺盼藍著色的細胞呈深藍色，是不健康或已死亡的細胞，不能計數(shù)。

找出計數(shù)板上的方格，計算四角大格內(nèi)總細胞數(shù)，大格線者只計左側(cè)和上方，不計右側(cè)和下方細胞懸液中細胞

密度計算公式為:細胞數(shù)/mL= (四角大格內(nèi)細胞數(shù)/4) x104x2

4、根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果，以單位細胞數(shù)(細胞數(shù)/mL)為縱坐標，以時間為橫坐標繪制生長曲線。

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