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實(shí)驗(yàn)意義

1.可應(yīng)用于闡明基因組結(jié)構(gòu)與功能以及基因之間相互作用的科學(xué),對(duì)于探索基因在生命活動(dòng)中的作用及其機(jī)制具有重要意義。

2.能夠?yàn)橐恍┘膊√峁┬碌脑\斷方法和治療方法，可有助于醫(yī)生獲得更多治療信息并進(jìn)行個(gè)性化精準(zhǔn)醫(yī)療。

實(shí)驗(yàn)原理及步驟

1. siRNA的設(shè)計(jì)和選擇:根據(jù)研究目的選擇合適的數(shù)據(jù)庫(kù)及軟件篩選靶序列的siRNA,通常需要設(shè)計(jì)多個(gè)siRNA,找到zui you zui有效的siRNA序列;

2. siRNA的制備:常用的體外制備方法有化學(xué)合成、體外轉(zhuǎn)錄、長(zhǎng)片段dsRNA經(jīng)RNase Il類(lèi)降解，以及通過(guò)siRNA表達(dá)質(zhì)粒載體或者病毒載體以及PCR制備的siRNA表達(dá)框架(siRNA expression cassettes, SECs)在細(xì)胞中表達(dá)制備siRNA;

3. siRNA的轉(zhuǎn)染: siRNA. siRNA表達(dá)載體或者siRNA表達(dá)框架轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞的方法主要有磷酸鈣共沉淀轉(zhuǎn)染、電穿孔轉(zhuǎn)染機(jī)械法(顯微注射和基因槍) . 陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑轉(zhuǎn)染;

4.檢測(cè)靶基因的表達(dá): WB等方法檢測(cè)靶基因的表達(dá)或者可以通過(guò)標(biāo)記siRNA(如熒光標(biāo)記)分析其表達(dá)，還可用作siRNA胞內(nèi)定位和雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)來(lái)追蹤轉(zhuǎn)染過(guò)程以及靶基因表達(dá)沉默過(guò)程。

實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 2-4周

2.交付標(biāo)準(zhǔn):質(zhì)粒、片段驗(yàn)證結(jié)果、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟.試劑、儀器等)

需確認(rèn)的信息

1.基因的種屬及ID號(hào)

2.基因序列

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：