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胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合情況的驗(yàn)證: RIP

實(shí)驗(yàn)意義

研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)的結(jié)合情況，有助于了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的動(dòng)態(tài)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)miRNA的調(diào)控靶點(diǎn)，可了解惡性腫瘤以及遺傳學(xué)疾病等整體水平的RNA變化以及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化，應(yīng)用于病理診斷及科學(xué)研究。

實(shí)驗(yàn)原理及步驟

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)的基本原理是使用目標(biāo)蛋白的抗體捕獲內(nèi)源性的RNA-蛋白的復(fù)合物，然后通過(guò)免疫沉淀的方法把RNA-蛋白復(fù)合物一起分離下來(lái)，然后通過(guò)RT-PCR. RIP-Seq (高通量

測(cè)序)或RIP-Chip (microarray) 來(lái)鑒定結(jié)合的RNA序列。RIP流程如下圖

結(jié)果展示：

實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-3個(gè)月

2.交付標(biāo)準(zhǔn): RIP鑒定結(jié)果報(bào)告、分析報(bào)告、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試劑、耗材、實(shí)驗(yàn)步驟)、

原始數(shù)據(jù)等

需確認(rèn)的信息

1.目的基因與蛋白信息。

2.是否提供抗體

3.樣本分組及分析要求

參考文獻(xiàn)

[1] Gagliardi M, Matarazzo M R. RIP: RNA Immunoprecipitation[J]. Methods in Molecular Biology, 2016, 1480:73.

[2] Meyer K，K?Ster T，Nolte C . et al. Adaptation of iCLIP to plants determines the binding landscape of the clock-regulated RNA-binding protein AtGRP7[J] Genome Biology, 2017, 18(1):204.

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